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重组蛋白复溶方法步骤

来源:天正源生物技术部 发布时间:2025-01-02 浏览量:98次

蛋白复溶注意事项蛋白复溶:蛋白冻干粉主要分布在西林瓶底部边缘一圈,如果是运输过程造成冻干粉脱落散落在瓶子其他位置,建议复溶之前先离心。目前没有针对西林瓶专用离心机,可将瓶放置在50mL离心管中,用脱脂棉固定,瞬时离心之后再复溶,用移液器吸取适量无菌水(建议按照说明书推荐浓度进行复溶,具体也可根据客户实际实验需要,但浓度不宜过高,会导致盐离子浓度过高影响蛋白的溶解效率和稳定性),直接伸入西林瓶底部,沿西林瓶底部画一个圈,边转边打出液体,液体全部打出后不要更换枪头小心吹吸几下,使均匀分布在瓶底的蛋白冻干粉溶解,然后将复溶后的液体吸出。注意事项:西林瓶胶塞可以打开,打开前瞬时离心,如果没有无菌和无热源要求可在外面打开,如果有无菌无热源要求可在超净台打开,如果蛋白产品规格比较小(10ug),溶解时加入水体积小,不建议使用注射器直接注水复溶,会导致针头中蛋白损失严重。

根据是要要求按步骤复溶:

1:判断实验周期。短期实验<=7 天,溶解材料:复溶缓冲液;长期实验>=7 天,溶解材料:复溶缓冲液、载体蛋白。

 2: 开盖前离心。冻干粉在运输过程中,会因为外力因素粘附于管壁或者管盖上,在开盖之前,先通过离心操作,将冻干粉收集于管底,避免损失和浪费。建议 10,000-12,000 rpm 高速离心 30 s;若没有高速离心机,3,000-3,500 rpm 离心 5 min。

3: 短期实验:向冻干粉中加入提供的复溶缓冲液,用枪头轻轻吹打混匀,重悬至浓度不低于 100 μg/mL。分装每管不少于 20 μL.

长期实验:先用复溶缓冲液将蛋白溶解,再用含载体蛋白 (0.1% BSA) 的溶液进一步稀释,浓度不低于 100 μg/mL,然后分装冻存于 -20°C 至 -80°C。

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