单链抗体(ScFv)是由抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过15-20个氨基酸的短肽连接而成，不含Fc片段，属于小分子基因工程抗体。完整的抗体由两条重链(heavy chain, H)和两条轻链(light chain, L)构成，测序获得抗体基因序列后，通过人工合成的连接肽(Linker) 基因将抗体重链可变区(VH) 和轻链可变区(VL) 连接成重组基因，由该重组基因表达的抗体就称为单链抗体(ScFv) 。与经典抗体分子相比，ScFv具有分子量小(约占完整抗体分子的1/6)的特征，能够自发折叠，形成天然结构，具有抗原结合特性。ScFv在抗病毒、肿瘤治疗、自身免疫病治疗，靶向药物治疗等等方面具有广泛的应用前景。

上篇公众号文章中已经详解了通过杂交瘤测序获得抗体可变区序列Fab片段的原理及实验流程。近日，武汉天正源生物技术有限公司顺利向中科院某研究所交付了CD1** CD2**的单链抗体和序列，在这里和大家分享这个项目的服务内容及实验结果。

项目流程

2021年1月 签订合同

2021年1月 合成基因，哺乳动物细胞表达真核抗原

2021年2月 免疫小鼠

2021年4月 细胞融合，制备单抗细胞株

2021年6月 客户验证杂交瘤上清，选中5+3株阳性克隆

2021年7月 杂交瘤测序，构建表达载体

2021年8月 表达并交付ScFv蛋白

2021年9月 客户验证ScFv，证明获得高亲和力的ScFv序列

整个全程无延误，无反复，一气呵成，完美收官!感谢客户的积极配合，最重要当然是客户给的评价了：“很棒!!!“。

分享项目的几个精彩花絮:

抗原制备

CD1**CD2**

 

天正源生物拥有经验丰富的技术团队，通过先进的哺乳动物瞬时表达技术，制备出真核抗原，抗原纯度高，无降解，可用于动物免疫。

小鼠抗血清ELISA检测

 

 

针对真核蛋白抗原进行的ELISA检测。小鼠抗血清ELISA效价>1:160000，高效价可进行小鼠融合及单克隆细胞株筛选

单克隆抗体流式验证结果

 

 

筛选到的单克隆细胞株上清给客户进行流式验证，客户验证结果显示有多株细胞均达到理想结果，对这些细胞株进行测序，得到抗体序列。

单链抗体表达结果

     CD1**scFV    CD2**scFV

 

 

杂交瘤测序得到的ScFV序列构建表达载体，表达出ScFV抗体，抗体纯度高。

scFV抗体验证结果

 

 

 

单链抗体验证结果显示该抗体效果达到客户要求。